溶液I: Na₂CO₃   NaOH溶液 （已配置成10X）,用时稀释10倍

溶液II: CuSO₄.5H₂O酒石酸钾钠（或酒石酸钠）溶液。
将稀释后的溶液I与溶液II,已50：1的比例混合，混合后即为Folin-酚试剂甲，此试剂只能用一天，过期失效。

 

      原液浓度为2moL/L，使用前需稀释一倍，用多少稀释多少。使其最后浓度为1moL/L

此为Folin—酚试剂乙应用液。Folin—酚试剂乙原液平时应密封贮存于4℃冰箱中避光保存。

 

取14只试管分成两组，按下表顺序加入试剂，混匀，于室温℃放置10分钟。再加入0.5毫升试剂乙，立即摇匀，在室温放置30分钟，然后于500nm处比色。测定光密度值。取两组测定的平均值， 以蛋白质浓度为横座标,光密度值为纵座标，绘制标准曲线值为定量的依据。

试剂/管号	0	1	2	3	4	5	6
BSA/ml(250ug/ml)	0	0.1	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0
蒸馏水/ml	1.0	0.9	0.8	0.6	0.4	0.2	0
试剂甲/ml	5	5	5	5	5	5	5
试剂乙/ml	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5

 

1、取1毫升样品溶液（约合20-250微克多肽或蛋白质）加入5毫升试剂甲混匀，于室温放置10分钟，

2、加0.5毫升试剂乙(Folin—酚)；立即摇匀，于室温保温30分钟：然后于500nm处比色，以1毫升水代替样品作空白对照。测定后，可从标准曲线中查出未知样品的浓度。

      若用0.5厘米光程的比色杯进行比色，可按下面方法进行操作；取0.2毫升样品溶液（约含5—100微克多肽或蛋白质），加入1毫升试剂甲（可选用 0.3-0.5厘米直经的小试管）混匀，10分钟后，再加入0.1毫升试剂乙，立即混匀，30分钟后比色。一般来说，若多肽或蛋白质浓渡在2-25微克，测波长755nm，而25微克以上则采用500nm比色为宜。