流式细胞术检测
1、 检测指标：
1） DNA倍体分析、DNA含量分析、细胞周期、细胞凋亡。
2） 细胞表面抗原分析：淋巴细胞免疫分型、白血病及淋巴瘤免疫分型、血小板相关抗体分析、HLA-B27、PNH相关抗原检测（CD55/CD59）、胞内细胞因子检测等。
3） 其它指标：细胞内钙离子测定、耐药基因检测（p170、MRP、LRP）及凋亡基因（P53、CD95、c-erb B2、Bcl-2及Bax等。
2、 样本及来源：
1) 单个细胞：1~2×106 个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
2) 外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、 收费标准：
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编号 |
规格 |
价格（￥） |
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FWO-1 |
单色标记 |
30/T |
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FWO-2 |
双色标记 |
50/T |
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FWO-3 |
三色标记 |
60/T |
说明：
1、 实验所用的流式细胞仪为COULTER EPICS XL。
2、 用户需要进行流式细胞仪检测时须提前预约，同时说明实验目的、方法等。一次送检标本数不少于10个。如果一次送检标本总数不足10个，每个测试费用为标准收费×2。
3、 我公司在正式接受实验委托一周内交付实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。
4、 用户须一次性全额预付实验费。
5、 部分常用荧光探针，如PI等，我公司可免费提供；特殊标记物，如CD抗体等，用户须另行购买，也可委托我公司代购；用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。
6、 由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。
7、 流式细胞术检测样品推荐制备方法：
A. 直接标记抗体（FITC标记抗体）：
(1) 收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。 加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法：
（1）收集2×106个细胞，用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次，800rpm离心5min。
（2）用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2ml PBS重悬细胞，800rpm离心5min；
（3）用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。
（4）加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS 重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。
（5）加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。
（6）加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞；固定待测。
（7）流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
C. 细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析(PI染色)用样品的制备：
（1）待测样本制成单细胞悬液，然后200g离心5分钟，弃上清。
（2）用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。
（3）调整细胞浓度为106细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
（4）PI染液终浓度为50微克/毫升，RNase A终浓度为20微克/毫升。
8、 请在送样的同时提供样本来源及处理方法等信息，样品检测后原则上本公司不负责保存。 | 
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